Định lượng miRNA bằng kỹ thuật Real-time RT-PCR trong chẩn đoán sớm ung thư phổi
Ung thư phổi là loại ung thư phổ biến nhất trên toàn thế giới, chiếm khoảng 25% trong tổng số các ca ung thư. Mặc dù tỷ lệ tử vong do ung thư phổi giảm đều đặn trong 2 thập kỷ qua, chủ yếu là do các chương trình vận động hạn chế sử dụng thuốc lá, ung thư phổi vẫn là nguyên nhân hàng đầu gây tử vong do ung thư ở cả nam và nữ. Chính vì vậy, việc phát triển của một xét nghiệm ít xâm lấn, ví dụ như sinh thiết lỏng, để phát hiện ung thư phổi ở giai đoạn sớm (trước khi có triệu chứng lâm sàng) là rất quan trọng. Trong bài viết này, chúng tôi xin phép giới thiệu đến quý độc giả một công trình nghiên cứu về giải pháp chẩn đoán sớm ung thư phổi bằng cách định lượng miRNA sử dụng kỹ thuật Real-time RT-PCR. Nghiên cứu được đăng tải trên JoVE.
MicroRNA (miRNA) là gì?
MicroRNA (miRNA) là các RNA đặc hiệu cho từng loại mô, rất ngắn, không mã hóa và tham gia vào điều hòa biểu hiện gen. MicroRNA có thể đóng vai trò là một “sứ giả” ngoại bào truyền đạt các tín hiệu sinh học qua lại giữa khối u và vi môi trường xung quanh. Do đó, các miRNA có thể được xem là ứng cử viên lý tưởng cho các phương pháp chẩn đoán sớm ung thư phổi.
Định lượng miRNA bằng kỹ thuật Real-time RT-PCR như thế nào?
Trong nghiên cứu này, các tác giả đã phát triển một quy trình định lượng miRNA bằng kỹ thuật Real-time RT-PCR nhưng sử dụng các thẻ có nhiều vi kênh để chứa phản ứng thay vì dùng các ống 0.2ml thông thường. Quy trình hoàn chỉnh bao gồm:
- Thu nhận huyết tương từ máu toàn phần. Bước thu nhận này cực kỳ quan trọng và cố gắng tránh làm vỡ hay thu nhầm tế bào bạch cầu (vì trong tế bào bạch cầu cũng có miRNA)
- Đánh giá mức độ tán huyết bằng quang phổ
- Tách chiết RNA tổng số từ huyết tương bằng hệ thống tách chiết tự động Maxwell RSC
- Chuyển đổi miRNA thành cDNA bằng kit tổng hợp cDNA đặc hiệu cho miRNA TaqMan MicroRNA Reverse Transcription Kit
- Thực hiện phản ứng tiền nhân bản (Pre-Amplification) để làm giàu các trình tự mục tiêu
- Định lượng các cDNA mục tiêu bằng kỹ thuật Real-time RT-PCR trên thẻ .
Tác giả: Khôi Nguyễn
