Phương pháp phát hiện bệnh Tai xanh (PRRSV) trên lợn

Tổng quan

Bệnh tai xanh là do virus thuộc giống Arterivirus, họ Arteriviridae, bộ Nidovirales, có cấu trúc vỏ bọc dạng chuỗi đơn RNA.

Virus này có 3 chủng:

Chủng 1 gồm những virus thuộc dòng Châu Âu (độc lực thấp)

Chủng 2 gồm những virus thuộc dòng Bắc Mỹ (độc lực cao)

Chủng 3 gồm những virus thuộc dòng Trung Quốc (độc lực cao)

Con đường lây: do tiếp xúc trực tiếp, qua đường không khí, dụng cụ chăn nuôi, tinh dịch, côn trùng (muỗi, ruồi).

Các phương pháp chẩn đoán bệnh tai xanh

1. ELISA

Xét nghiệm hấp thụ miễn dịch liên kết với enzym (ELISA) là xét nghiệm phổ biến nhất để phát hiện kháng thể PRRSv và có độ đặc hiệu cao tới 99,9% và độ nhạy lên đến 98,8%, được chứng minh bởi nghiên cứu tại Đại học bang Iowa năm 2010. The protein N dồi dào của PRRSv được sử dụng để bắt giữ các kháng thể chống PRRSv từ các mẫu mô trên bề mặt của đĩa thử được tráng phủ và một kháng thể thứ cấp liên hợp với peroxidase được sử dụng để hình dung kháng thể kháng PRRSv đã bắt giữ.

Mặc dù ELISA vừa nhanh chóng vừa tiện lợi, nhưng nó cũng có những hạn chế của nó. Đáp ứng miễn dịch thường thay đổi giữa các loài động vật và mức độ kháng thể được phát hiện không nhất thiết phản ánh độc lực của các chủng phân lập. Hơn nữa, các kháng thể có nguồn gốc từ mẹ và các kháng thể từ thức ăn có thể làm ô nhiễm kết quả. Các kết quả âm tính giả trong thời kỳ đầu nhiễm trùng cũng có thể là một vấn đề.

2. FMIA

Xét nghiệm miễn dịch vi cầu huỳnh quang (FMIA) là một phiên bản đa hợp của ELISA sử dụng các hạt huỳnh quang được nhuộm phân biệt để thu giữ nhiều kháng thể chống PRRSv, sau đó được đánh dấu bằng các kháng thể thứ cấp được đánh dấu huỳnh quang. Kỹ thuật này cho phép phát hiện đồng thời một số kháng thể khác nhau trong một mẫu nhỏ. Trong huyết thanh, FMIA đã chứng minh độ nhạy 98% và độ đặc hiệu 95%. Hơn nữa, bằng cách sử dụng chất lỏng uống, mà ELISA truyền thống nổi tiếng có độ nhạy thấp, FMIA có độ nhạy hơn 92% và độ đặc hiệu 95%. Nó cũng nhạy hơn ELISA để phát hiện các bệnh nhiễm trùng sớm.

3. IFA gián tiếp

Xét nghiệm kháng thể huỳnh quang gián tiếp (IFA) tương tự như IPMA nhưng sử dụng các kháng thể thứ cấp được đánh dấu huỳnh quang để phát hiện các kháng thể chống PRRSv bị bắt giữ. IFA gián tiếp đã chứng tỏ độ đặc hiệu tốt, nhưng độ nhạy phụ thuộc vào nhiều yếu tố, bao gồm các loại tế bào được sử dụng để thu giữ kháng thể, quy trình phòng thí nghiệm và hồ sơ kháng nguyên của kháng thể chống PRRSv. Thông thường, IFA gián tiếp được thực hiện sau ELISA để xác nhận kết quả dương tính giả, nhưng cũng đã được sử dụng trong các chương trình giám sát sử dụng dịch miệng và truyền cơ.

4. Test nhanh

Giống như trường hợp phát hiện vi-rút, các que thử hiện trường có khả năng phát hiện kháng thể đặc hiệu với PRRSv (sử dụng protein N của vi-rút). Que thử hiện trường rẻ, nhanh chóng và dễ sử dụng mà không cần thiết bị đắt tiền, có độ nhạy và độ đặc hiệu được báo cáo lần lượt là 93% và 98%. Tuy nhiên, các dải này không được sử dụng rộng rãi hiện nay.

5. Phương pháp Real time RT-PCR

Phương pháp Real Time RT-PCR có độ nhạy và độ chính xác cao phản ứng này có thể phân biệt virus PRRS thuộc chủng Châu Âu, Bắc Mỹ và Trung Quốc (virus PRRS độc lực cao) bằng việc sử dụng các cặp mồi và mẫu dò đặc hiệu.

Quy trình thực hiện phương pháp Real time RT-PCR:

B.1. Chiết tách ARN

B.2. Tiến hành phản ứng rRT-PCR

B.3. Đánh giá kết quả

Kết quà chạy rRT – PCR được công nhận khi:

– Đối chứng dương tính cho giá trị Ct đã biết (± 2).

– Đối chứng âm tính không có Ct.

– Mẫu được coi là dương tính khi có Ct ≤ 35.

– Mẫu được coi là âm tính nếu không có Ct.

– Mẫu được coi là nghi ngờ nếu Ct >35, trường hợp này phải xét nghiệm lại hoặc dùng phương pháp khác (phân lập virus) để khẳng định.

Giải pháp xét nghiệm bệnh ASFV của Công ty TNHH Thiết bị ABT

Công ty TNHH Thiết bị ABT đang cung cấp dòng kit TOPSPEC® PRRSV RT-qPCR Kit để phát hiện DNA Virus bằng kỹ thuật Real-time PCR,  sử dụng hệ mồi – mẫu dò đặc hiệu có độ chính xác cực cao và kết quả có thể đọc trực tiếp trên máy tính trong thời gian ngắn.

—> Mời Quý Khách hàng tham khảo sản phẩm theo link: >>> Kit phát hiện Bệnh Tai xanh <<<

Công ty TNHH Thiết bị ABT chúng tôi luôn tự tin và tự hào với đội ngũ nhân viên có nhiều năm kinh nghiệm về lĩnh vực sinh học phân tử, đặc biệt là các xét nghiệm liên quan đến xét nghiệm bệnh virus, vi khuẩn trên người, thực phẩm, thủy sản, thú y…Nếu có bất kì thắc mắc hay cần trợ giúp, Quý khách hàng vui lòng liên hệ thông tin dưới đây để được hỗ trợ nhanh chóng: