Skip to content
ABT – Trách nhiệm và Sáng tạoABT – Trách nhiệm và Sáng tạo

  • Menu
  • CÔNG TY TNHH THIẾT BỊ ABT

    Chuyên thiết bị khoa học kỹ thuật – dụng cụ – hóa chất phòng thí nghiệm

  • Giỏ hàng

    Chưa có sản phẩm trong giỏ hàng.

    Danh mục sản phẩm
    • KIT TÁCH CHIẾT
      • KIT TÁCH CHIẾT CỘT SILICA
      • KIT TÁCH CHIẾT THÔ
      • KIT TÁCH CHIẾT TỪ
    • KIT REAL-TIME PCR
      • KIT PHÁT HIỆN BỆNH TRÊN NGƯỜI
      • KIT PHÁT HIỆN BỆNH THỦY SẢN
        • KIT PCR PHÁT HIỆN BỆNH THỦY SẢN
      • KIT PHÁT HIỆN BỆNH ĐỘNG VẬT
        • KIT ĐỊNH DANH LOÀI
      • KIT PHÁT HIỆN BỆNH VI SINH THỰC PHẨM
      • KIT GMO
    • KIT TEST NHANH
      • KIT TEST NHANH THÚ Y
      • KIT TEST NHANH ĐỘC TỐ
      • KIT TEST NHANH KHÁNG SINH
    • KIT ELISA
    • NUÔI CẤY TẾ BÀO
    • HÓA CHẤT KHÁC
      • MÔI TRƯỜNG VẬN CHUYỂN
      • MASTER MIX
        • Hãng Solis BioDyne
      • BIOBASIC
      • HÓA CHẤT KHÁC
    • VẬT TƯ
      • QUE LẤY MẪU
      • VẬT TƯ TÁCH CHIẾT
      • VẬT TƯ PCR
      • VẬT TƯ REAL-TIME PCR
      • VẬT TƯ KHÁC
    • DỊCH VỤ
      • GIẢI TRÌNH TỰ
      • TỔNG HỢP MỒI
    • THIẾT BỊ
      • THIẾT BỊ ELISA
      • THIẾT BỊ REAL-TIME PCR
        • MÁY REALTIME PCR
        • MÁY PCR
      • THIẾT BỊ TÁCH CHIẾT
        • MÁY TÁCH CHIẾT TỰ ĐỘNG
      • THIẾT BỊ SINH HỌC PHÂN TỬ
      • THIẾT BỊ CƠ BẢN
        • MÁY KHUẤY TỪ
        • MÁY LẮC
        • MÁY LY TÂM
        • MÁY Ủ NHIỆT KHÔ (DRY BATH)
      • THIẾT BỊ KHÁC
        • MÁY ĐIỆN DI
        • MÁY QUANG PHỔ
        • MÁY CHỤP ẢNH GEL TỰ ĐỘNG
  • Trang Chủ
  • Giới Thiệu
    • Năng Lực Doanh Nghiệp
    • Tầm Nhìn – Sứ Mệnh
  • Sản phẩm
  • Tin tức
    • Chuyên môn
    • Hỏi Đáp
  • Tư Vấn
  • TUYỂN DỤNG
  • Liên hệ

Realtime PCR HRM Sử Dụng Dye EvaGreen

15/03/2025 Nguyễn Hùng

MỤC LỤC BÀI VIẾT

  • 1. Giới thiệu
  • 2. Nguyên lý hoạt động
  • 3. Ứng dụng của Realtime PCR HRM sử dụng EvaGreen
  • 4. Quy trình thực hiện
    • 4.1 Chuẩn bị mẫu
    • 4.2 Chuẩn bị phản ứng PCR
  • 5. Phân tích kết quả
  • 6. Ưu điểm của kỹ thuật sử dụng EvaGreen
  • 7. Kết luận

1. Giới thiệu

Realtime PCR kết hợp với High-Resolution Melting (HRM) là một phương pháp mạnh mẽ để phân tích sự khác biệt trong trình tự DNA mà không cần sử dụng probe đặc hiệu. Dye EvaGreen là một trong những thuốc nhuộm huỳnh quang được sử dụng phổ biến trong kỹ thuật này do tính đặc hiệu cao, độ nhạy tốt và ít gây ức chế phản ứng PCR.

2. Nguyên lý hoạt động

EvaGreen là một chất nhuộm liên kết với DNA sợi đôi, phát huỳnh quang mạnh khi liên kết với DNA và mất tín hiệu khi DNA biến tính thành sợi đơn. Trong quá trình HRM, DNA được nung nóng dần dần, làm đứt gãy liên kết giữa các sợi, từ đó tạo ra một đường cong tan đặc trưng phản ánh sự khác biệt về trình tự DNA. Sự thay đổi trong nhiệt độ tan (Tm) có thể được phân tích để xác định các biến thể trình tự DNA.

3. Ứng dụng của Realtime PCR HRM sử dụng EvaGreen

  • Phát hiện đa hình nucleotide đơn (SNP): So sánh sự khác biệt nhỏ trong trình tự DNA giữa các mẫu.
  • Phân biệt kiểu gen: Xác định các biến thể gen một cách nhanh chóng và chính xác.
  • Kiểm tra tính thuần chủng của giống cây trồng: Phát hiện sự pha trộn giữa các giống khác nhau.
  • Phân tích methyl hóa DNA: Đánh giá mức độ methyl hóa của các trình tự DNA cụ thể để nghiên cứu điều hòa biểu hiện gen.
  • Phát hiện đột biến trong ung thư: Xác định sự hiện diện của các đột biến liên quan đến bệnh lý di truyền.
  • Kiểm tra vi sinh vật trong thực phẩm và y tế: Xác định các chủng vi khuẩn hoặc virus bằng phân tích trình tự DNA.

4. Quy trình thực hiện

4.1 Chuẩn bị mẫu

  • Chiết xuất DNA từ mô, tế bào hoặc mẫu vi sinh vật.
  • Định lượng và kiểm tra độ tinh khiết của DNA bằng phương pháp quang phổ hoặc điện di agarose.
  • Nếu cần, tiến hành khuếch đại trước bằng PCR.

4.2 Chuẩn bị phản ứng PCR

  • Thành phần phản ứng:
    • Buffer thích hợp để tối ưu hoạt động enzyme
    • dNTPs ở nồng độ phù hợp (thường 200 µM mỗi loại)
    • DNA polymerase chịu nhiệt có độ chính xác cao
    • Primer đặc hiệu (thường có chiều dài 18-25 nucleotide, nhiệt độ gắn phù hợp)
    • EvaGreen dye ở nồng độ khuyến nghị
    • Mẫu DNA có nồng độ phù hợp (thường 1-10 ng/reaction)
  • Thiết lập chương trình chạy PCR:
    • Biến tính ban đầu: 95°C, 2 phút
    • Chu kỳ khuếch đại (40 chu kỳ):
      • 95°C, 10 giây (biến tính)
      • 60°C, 20 giây (gắn mồi)
      • 72°C, 20 giây (kéo dài)
    • Giai đoạn HRM: Nhiệt độ tăng dần từ 65°C đến 95°C với bước tăng nhỏ (~0.1°C/giây) để phân tích độ tan của DNA.

5. Phân tích kết quả

  • Xây dựng đường cong nóng chảy: Độ huỳnh quang giảm dần khi DNA bị biến tính, tạo ra một đường cong đặc trưng.
  • So sánh giá trị nhiệt độ nóng chảy(Tm): Các mẫu có trình tự DNA khác nhau sẽ có giá trị Tm khác nhau.
  • Nhận diện đột biến hoặc biến thể: Dựa vào sự khác biệt trong đường cong HRM để xác định mẫu có đột biến hay không.

Phân tích dữ liệu HRM thường sử dụng phần mềm chuyên dụng để đánh giá sự khác biệt giữa các mẫu, giúp xác định chính xác các biến thể di truyền hoặc đột biến gen.

6. Ưu điểm của kỹ thuật sử dụng EvaGreen

  • Chi phí thấp hơn so với probe đặc hiệu.
  • Tính nhạy cao, phát hiện các biến thể nhỏ trong DNA với độ chính xác cao.
  • Dữ liệu HRM có thể được sử dụng để phân tích nhiều loại biến thể di truyền khác nhau.
  • EvaGreen ít gây ức chế phản ứng PCR, cho kết quả ổn định hơn so với SYBR Green.
  • Khả năng tái sử dụng trên nhiều hệ thống máy PCR realtime khác nhau.

7. Kết luận

Realtime PCR HRM sử dụng dye EvaGreen là một phương pháp mạnh mẽ và linh hoạt trong nghiên cứu di truyền và chẩn đoán phân tử. Nhờ vào khả năng phát hiện chính xác các đột biến nhỏ, phương pháp này đang được ứng dụng rộng rãi trong nhiều lĩnh vực khoa học và y học, đặc biệt là trong nghiên cứu di truyền, ung thư, và kiểm tra vi sinh vật.

Mời Quý Khách Đánh Giá

Bài viết cùng chủ đề

  • Z4336343128506 032f74f40a20879fb43db97f5d2c3bf8 Đa hình gen virus ASFV: Thách thức lớn trong kiểm soát bệnh tại trang trại
  • TẠi Sao PhẢi XÉt NghiỆm Hp Khi DẠ DÀy CÓ DẤu HiỆu BẤt ThƯỜng (6) HBV – nguyên nhân hàng đầu dẫn đến ung thư gan
  • HBV thể ẩn VIÊM GAN B THỂ ẨN LÀ GÌ? CÓ NGUY HIỂM KHÔNG?
  • Images1437681 Mg 3159 Thuc Hanh Lay Mau Benh Pham Yếu tố ảnh hưởng kết quả tách chiết DNA trong xét nghiệm dịch tả lợn châu Phi (phần 1)
  • Xet Nghiem Hcv Viêm gan C – Các xét nghiệm phổ biến
  • Abt Cau Truc Virus Cfsv Các loại vaccine CSFV
Danh mục sản phẩm
  • KIT TÁCH CHIẾT
    • KIT TÁCH CHIẾT CỘT SILICA
    • KIT TÁCH CHIẾT THÔ
    • KIT TÁCH CHIẾT TỪ
  • KIT REAL-TIME PCR
    • KIT PHÁT HIỆN BỆNH TRÊN NGƯỜI
    • KIT PHÁT HIỆN BỆNH THỦY SẢN
      • KIT PCR PHÁT HIỆN BỆNH THỦY SẢN
    • KIT PHÁT HIỆN BỆNH ĐỘNG VẬT
      • KIT ĐỊNH DANH LOÀI
    • KIT PHÁT HIỆN BỆNH VI SINH THỰC PHẨM
    • KIT GMO
  • KIT TEST NHANH
    • KIT TEST NHANH THÚ Y
    • KIT TEST NHANH ĐỘC TỐ
    • KIT TEST NHANH KHÁNG SINH
  • KIT ELISA
  • NUÔI CẤY TẾ BÀO
  • HÓA CHẤT KHÁC
    • MÔI TRƯỜNG VẬN CHUYỂN
    • MASTER MIX
      • Hãng Solis BioDyne
    • BIOBASIC
    • HÓA CHẤT KHÁC
  • VẬT TƯ
    • QUE LẤY MẪU
    • VẬT TƯ TÁCH CHIẾT
    • VẬT TƯ PCR
    • VẬT TƯ REAL-TIME PCR
    • VẬT TƯ KHÁC
  • DỊCH VỤ
    • GIẢI TRÌNH TỰ
    • TỔNG HỢP MỒI
  • THIẾT BỊ
    • THIẾT BỊ ELISA
    • THIẾT BỊ REAL-TIME PCR
      • MÁY REALTIME PCR
      • MÁY PCR
    • THIẾT BỊ TÁCH CHIẾT
      • MÁY TÁCH CHIẾT TỰ ĐỘNG
    • THIẾT BỊ SINH HỌC PHÂN TỬ
    • THIẾT BỊ CƠ BẢN
      • MÁY KHUẤY TỪ
      • MÁY LẮC
      • MÁY LY TÂM
      • MÁY Ủ NHIỆT KHÔ (DRY BATH)
    • THIẾT BỊ KHÁC
      • MÁY ĐIỆN DI
      • MÁY QUANG PHỔ
      • MÁY CHỤP ẢNH GEL TỰ ĐỘNG
Danh mục theo Hãng
  • Hãng Solis BioDyne
  • HÃNG ELABSCIENCE
  • Hãng BioStone
Hỗ trợ trực tuyến
HOTLINE
(+84) 96 187 3386

info@abt-vn.com

Sản phẩm mới
  • KIT elisa bệnh marek KIT ELISA cạnh tranh định tính virus bệnh lở mồm long móng Type O Giá: Liên Hệ
  • KIT elisa bệnh marek KIT ELISA cạnh tranh định tính virus bệnh lở mồm long móng Type AsiaI Giá: Liên Hệ
  • KIT elisa bệnh marek KIT ELISA cạnh tranh định tính virus bệnh lở mồm long móng Type A Giá: Liên Hệ
  • Abt Kinh Hien Vi Cxl Kính hiển vi quang học, model: CxL (9135006) Giá: Liên Hệ
  • Ống PCR 0,2ml dải 8 có nắp vòm, Gunster (MB-P08AD) Giá: Liên Hệ
Bài viết mới
  • [Bản dịch] WHO khuyến cáo xét nghiệm DNA là phương pháp hàng đầu để phòng ngừa ung thư cổ tử cung Chức năng bình luận bị tắt ở [Bản dịch] WHO khuyến cáo xét nghiệm DNA là phương pháp hàng đầu để phòng ngừa ung thư cổ tử cung
  • TUYỂN DỤNG NHÂN VIÊN KINH DOANH Chức năng bình luận bị tắt ở TUYỂN DỤNG NHÂN VIÊN KINH DOANH
  • Định hướng của Bộ Y tế trong thời gian tới nhằm chặn vấn nạn thực phẩm bẩn Chức năng bình luận bị tắt ở Định hướng của Bộ Y tế trong thời gian tới nhằm chặn vấn nạn thực phẩm bẩn
  • Gene “nhảy” là nhân tố để con người thành hình? Chức năng bình luận bị tắt ở Gene “nhảy” là nhân tố để con người thành hình?
  • Đa hình gen virus ASFV: Thách thức lớn trong kiểm soát bệnh tại trang trại Chức năng bình luận bị tắt ở Đa hình gen virus ASFV: Thách thức lớn trong kiểm soát bệnh tại trang trại
Thông tin liên hệ

CÔNG TY TNHH THIẾT BỊ ABT

  • Địa chỉ trụ sở chính: Số 24-BT3, Khu đô thị Văn Quán – Yên Phúc, phường Phúc La, Quận Hà Đông, Thành phố Hà Nội, Việt Nam
  • Laos: phố Nongbone, phường Xaysettha, Thành phốVientiane, Laos
  • Điện thoại: (024) 7300 3386
  • Hotline: (+84) 96 187 3386
  • Email: info@abt-vn.com
    Mã số doanh nghiệp: 0107595864
    Đăng ký lần đầu ngày 13/10/2016
    Cơ quan cấp: Sở kế hoạch và đầu tư TP. Hà Nội
Về chúng tôi
  • Liên Hệ
  • Giới Thiệu
  • Hướng Dẫn Kỹ Thuật
Hỗ trợ khách hàng
  • Chính sách và quy định chung
  • Chính sách đổi trả hàng
  • Chính sách giao hàng
  • Chính sách bảo mật
  • Chính sách bảo hành
Kết nối với chúng tôi
  • Facebook
  • Youtube
  • Twitter
  • Wechat
  • Nhắn tin qua Zalo
  • Nhắn tin qua Facebook
  • (+84) 961 873 386
  • Menu

  • Trang Chủ
  • Giới Thiệu
    • Năng Lực Doanh Nghiệp
    • Tầm Nhìn – Sứ Mệnh
  • Sản phẩm
  • Tin tức
    • Chuyên môn
    • Hỏi Đáp
  • Tư Vấn
  • TUYỂN DỤNG
  • Liên hệ
  • Danh mục sản phẩm
    • KIT TÁCH CHIẾT
      • KIT TÁCH CHIẾT CỘT SILICA
      • KIT TÁCH CHIẾT THÔ
      • KIT TÁCH CHIẾT TỪ
    • KIT REAL-TIME PCR
      • KIT PHÁT HIỆN BỆNH TRÊN NGƯỜI
      • KIT PHÁT HIỆN BỆNH THỦY SẢN
        • KIT PCR PHÁT HIỆN BỆNH THỦY SẢN
      • KIT PHÁT HIỆN BỆNH ĐỘNG VẬT
        • KIT ĐỊNH DANH LOÀI
      • KIT PHÁT HIỆN BỆNH VI SINH THỰC PHẨM
      • KIT GMO
    • KIT TEST NHANH
      • KIT TEST NHANH THÚ Y
      • KIT TEST NHANH ĐỘC TỐ
      • KIT TEST NHANH KHÁNG SINH
    • KIT ELISA
    • NUÔI CẤY TẾ BÀO
    • HÓA CHẤT KHÁC
      • MÔI TRƯỜNG VẬN CHUYỂN
      • MASTER MIX
        • Hãng Solis BioDyne
      • BIOBASIC
      • HÓA CHẤT KHÁC
    • VẬT TƯ
      • QUE LẤY MẪU
      • VẬT TƯ TÁCH CHIẾT
      • VẬT TƯ PCR
      • VẬT TƯ REAL-TIME PCR
      • VẬT TƯ KHÁC
    • DỊCH VỤ
      • GIẢI TRÌNH TỰ
      • TỔNG HỢP MỒI
    • THIẾT BỊ
      • THIẾT BỊ ELISA
      • THIẾT BỊ REAL-TIME PCR
        • MÁY REALTIME PCR
        • MÁY PCR
      • THIẾT BỊ TÁCH CHIẾT
        • MÁY TÁCH CHIẾT TỰ ĐỘNG
      • THIẾT BỊ SINH HỌC PHÂN TỬ
      • THIẾT BỊ CƠ BẢN
        • MÁY KHUẤY TỪ
        • MÁY LẮC
        • MÁY LY TÂM
        • MÁY Ủ NHIỆT KHÔ (DRY BATH)
      • THIẾT BỊ KHÁC
        • MÁY ĐIỆN DI
        • MÁY QUANG PHỔ
        • MÁY CHỤP ẢNH GEL TỰ ĐỘNG

Đăng nhập

Quên mật khẩu?